怎么使用干細胞無血清培養基

    大部分的干細胞無血清培養基擁有向細胞中轉輸離子的轉鐵蛋白和調理葡萄糖攝取量的胰島素，還有一部分蛋白質和清蛋白，纖維蛋白，胎球蛋白等，綜上所指的蛋白在細胞培育中具有各自不一樣的功用，如供給細胞貼壁所要的基質，抗生物反應器剪切力，供給細胞貼壁所需的基質，作為脂類和其他生長因子的載體等。

    干細胞無血清培養基和試劑被廣泛的應用于培養哺乳動物和無脊椎動物細胞以制備單克隆抗體，病毒抗原和重組蛋白等。大多數的無血清培養基含有向細胞內轉運離子的轉鐵蛋白和調節葡萄糖攝取量的胰島素，以及一些蛋白質和清蛋白，纖維蛋白，胎球蛋白等，這些蛋白在細胞培養中發揮各種不同的功能，如提供細胞貼壁所需的基質，抗生物反應器剪切力，作為脂質和其他生長分化因子的載體等。

   

使用方法

    目前，血清仍是動物細胞培養中zui基本的的添加物，尤其是在原代培養或者細胞生長狀況不良時，常常會先使用有血清的培養液進行培養，待細胞生長旺盛以后，再換成無血清培養液。細胞轉入無血清培養基培養要有一個適應過程，一般要逐步降低血清濃度，從10%減少到5%，3%，1%，直至無血清培養。在降低過程中要注意觀察細胞形態是否發生變化，是否有部分細胞死亡，存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性等。在實驗后這些細胞一般不再繼續保留，很少有細胞能夠長期培養于無血清培養基而不發生改變的。細胞轉入無血清培養之前，要留有種子細胞，種子細胞按常規培養于含血清的培養基中，以保證細胞的特性不發生變化。

    為了使細胞適應無血清培養，關鍵的是使所培養細胞：

    1.處于對數生長中期

    2.>90% 活細胞率

    3.適應時以較高的起始細胞接種

    細胞適應無血清培養基的方法

    1.直接適應——細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基（SFM）中。

    一些類型細胞可直接從包含血清的培養基適應無血清培養基。對于直接適應，接種細胞密度應該:2.5×10~3.5×10細胞/ml。當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml時，傳代培養細胞。當細胞密度在培養4到7天后達到2×10~4×10細胞/ml時，細胞*適應了無血清培養基。每隔3~5天，當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml，細胞活率在90%時，貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。

    2.連續適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基（SFM）中，與直接適應相比較，連續適應趨向對于細胞更加溫和一些。

    （1）以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養物到75%有血清培養基：25%SFM 混合培養基中，傳代培養。

    （2）當細胞密度>5×10細胞/ml時，以2×10到3×10細胞/ml細胞密度，在有血清培養基：SFM為50∶50的混合培養基中傳代培養。

    （3）以2×10到3×10細胞/ml細胞密度，25%有血清培養基和75% SFM中傳代培養。

    （4）當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml（接種后4到6天），在100%SFM培養基中傳代培養。

    （5）每隔3到5天，當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml，細胞活率在90%時，貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。

    建議備份前一次混合培養的培養物，直到每一次細胞適應了新的混合培養基。每一次減少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培養基中進行幾次傳代。

    在適應過程中，不要讓細胞生長過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意，與有血清培養基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白質，因而更易于受外界因素的影響。

    細胞培養適應替代血清：許多細胞利用連續適應方法能很好的適應，用包含FBS的的培養基和包含有替代血清的培養基1∶1（v∶v）的混合培養基培養細胞。通過下列的混合培養基的方式，連續幾代減少當前培養基的量：1∶2，1∶4，1∶16和100%替代培養基。每次適應改變血清比例時，傳代細胞2到3次。

    培養可以直接從FBS轉換到替代血清。一開始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清，生長的延遲可能會發生，4允許進行2到3次的傳代，使生長率恢復到以前的水平。

    特別需要強調的是：配制無血清培養液必須使用高質量的水，如石英玻璃蒸餾器經三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因為無血清培養基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護細胞的大分子，既便水中的有毒物質含量甚微，也可能對細胞產生致死性損害。這是無血清培養能否成功的關鍵因素之一。